PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段,但超過了該飽和度,裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除,必須靠多次抽提,方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外,體系太粘稠的壞處是,蛋白質(zhì)難以*去除,以及基因組 DNA 會(huì)斷裂得更厲害,所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個(gè)用途是,利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點(diǎn),在 RNA 抽提時(shí)獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點(diǎn)要提醒的是,某些植物樣品,在去除某些雜質(zhì)之前,是不能使用 PC 抽提的,否則核酸必定降解。PC抽提的優(yōu)勢(shì)是成本低廉,對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低,對(duì)于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。
二、高鹽沉淀法
高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法,同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法。與 PC 抽提方法相比,除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外,該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提,但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定,蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會(huì)更好一些。